酵母(S.pombe)直接转化试剂盒

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酵母(S.pombe)直接转化试剂盒

来源:123liu.com作者:西宝生物人气:-发表时间:2012-02-09 14:58:00【
酵母(S.pombe)直接转化试剂盒
本品为分裂酵母(Schizosaccharomyces pombe)转化试剂盒。向酵母培养液直接加入目标质粒和专用试剂,即可进行转化。利用独特技术,无需进行感受态细胞调制,经过一晚培养即可直接导入菌体。可简单进行多种基因破坏株的同时导入,因而可进行大量染色体组的筛选。请注意,本品的使用方法有适合少数检体的“软管法”和适合HT(高通量)的“96孔板法”两种。
[特点]
·加入了目标质粒和专用试剂的一步完成型。
·感受态细胞无需调制。
·使用96孔板可进行多检体处理。
·可使用软管法
·适应HT的低粘性试剂。
 [试剂盒内容]
 
20次用
100次用
500次用
Sp Transformation Reagent
2.25ml X 1支
11.5ml X 1支
57ml X 1支
Carrier DNA(5mg/ml)
0.1ml X 1支
0.5ml X 1支
1.25ml X 2支
[操作方法1]
■ 96孔板法
96孔板
↓←加入25μl YES培养基
菌种接入
↓在28~30℃情况下静置培养18~24小时
菌体悬浊
↓←将100μl质粒和试剂混合液
在46℃的恒温箱中放置2小时
10μl  spotting
↓在28~30℃的恒温箱中放置5~7日
转化的酵母 
1)菌体接入时请使用YPD琼脂培养基。使用YES琼脂培养基可能导致较低的转化率。准备好的菌落可冷藏保存一个月。
2)* 质粒·试剂混合液的调制
·Sp Transformation Reagent……90μl
·质粒DNA……………………………1μg
·Carrier DNA………………………4μl
 调制100μl灭菌水(处理多个受检体时请按情况调制所需量)
3)在42℃中放置4小时或在37℃中放置6小时也可达到效果。
[操作方法2]
■ 软管法
<酵母的培养>
2ml YES培养基
↓←菌种接入,调制至OD600:0.2
↓←取1ml至14ml的试管中
↓←在28~30℃振荡培养,至OD600:6.0~7.0
培养酵母液……(A)
<转化>
1.5ml的离心管
↓←将100μl质粒和试剂混合液混合
↓←加入25μl培养酵母液(A)在37℃恒温箱中放置2小时
预处理
↓在28~30℃的恒温箱中放置5~7天
转化后的酵母
1)菌种接入时请使用YPD琼脂培养基。使用YES琼脂培养基可能导致较低的转化率。准备好的菌落(96孔板)可冷藏保存一个月。
2)菌体浓度会影响转化率,请确认OD600
3)进行转化,酵母液请准备30次用的份量
4)* 质粒·试剂混合液的调制
·Sp Transformation Reagent……90μl
·质粒DNA……………………………1ug
·Carrier DNA……………………… 4μl
  调制100μl灭菌水
[使用例子]  使用96孔板法进行转化
用96孔板法进行转化,在质粒(Leucine合成酶标识Marker)中加入S.pombe(Leucine合成酶破坏株)后,在SD培养基(-Leucine)里预处理和培养。
 [使用次数]
 
20次用
100次用
500次用
96孔板法
-
1板(100孔)
5板(500孔)
软管法
20管
100管
500管
[转化率] 250cfu/μg以上
追求高转化率时,参照以下URL里的高效率转化步骤(软管法)。但是,此方法需要离心分离,会降低操作的简便性。
[保存条件]-20℃保存 
注)解冻产品请不要超过10次。为避免此状况,建议预先细分成合适的剂量,再保存到-20℃的环境中。
 [产品资料]
产品编号
品名
规格
容量
290-64301
S.pombe Direct Transformation Kit, Wako 酵母(S.pombe)直接转化试剂盒
基因研究用
20次用
296-64303
100次用
294-64304
500次用
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